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重组抗体制备系统/ b
详细介绍
噬菌体展示系统说明书
【系统说明】
本系统是用于抗体基因表达，制备重组抗体。宿主菌TG1为质粒载体pCANTAB5e复制和表达的宿主菌，无抗性，用2×YT培养基，37℃进行培养。载体pCANTAB5e为用于构建重组单链抗体scFv的载体，具有氨苄抗性，大小为4522bp，具体图谱及酶切位点如下示。辅助噬菌体M13K07用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其辅助下噬菌粒得以复制，并以融合的形式表达在噬菌体表面。在scFv基因后面含有一段编码Tag尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）终止密码子，位于scFv基因与cpIII基因之间，在抑制型细菌TG1中，这种琥珀密码子只有20％有效，故在蛋白翻译过程中可以通读而形成scFv-cpIII融合蛋白；但在非抑制型菌株中，如HB2151，此终止子被识别，同时scFv基因在翻译过程中在cpIII基因前终止，形成独立的抗体蛋白，滞留于细胞膜间隙，并在长时间培养后泄漏在培养液中，形成可溶性表达。
【系统内容】
A．融合表达宿主菌TG1（15％甘油保存）；
B．噬菌粒载体pCANTAB5e（DNA溶于TE Buffer，浓度50ng/ul）；
C．辅助噬菌体M13K07（滴度为1.2×1012pfu/ml）；
D. 可溶性表达宿主菌HB2151（15％甘油保存）。
【保存温度】
噬菌粒载体、宿主菌保存于-20℃。
辅助噬菌体请存放在4℃即可，不可冻存。
